粗蛋白的测定方法

【摘要】粗蛋白的定义就是饲料样品中的氮含量乘以系数6.25。大多数蛋白质一般都含16%的氮，该系数即由此推导而来，因此将饲料中氮的百分含量乘以100再除以16或者说乘以6.25，就可算出粗蛋白含量

试样选取和制备

选取具有代表性的试样用四分法缩减至200克，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

粗蛋白测定步骤

1、试样消煮：称取试样0.5～1克(含氮量5～80毫克)准确至0.0002克，放入凯氏烧瓶中，加入6.4克混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12毫升硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360～410℃)直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2小时。

2、氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入20毫升蒸馏水，转入100毫升容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20毫升硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20毫升注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10毫升氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4分钟降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1分钟，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

3、蒸馏检验：精确称取0.2克硫酸铵，代替试样，按5.1.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

4、滴定检测：用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L(4.6.2)盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。

蔗糖的空白测定

称取蔗糖0.5克，代替试样，按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2毫升。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3毫升。

粗蛋白测定分析

1、计算见下式：粗蛋白质(%)=(V2-V1)·c×0.0140×6.25/(m×V＇/V)×100。V2：滴定试样时所需标准酸溶液体积(毫升)，V1：滴定空白时所需标准酸溶液体积，毫升，c：盐酸标准溶液浓度，mol/L，m：试样质量(克)，V：试样分解液总体积，毫升，V：试样分解液蒸馏用体积，毫升，0.0140：与1.00毫升盐酸标准溶液〔c(HCl)=1.000mol/L〕相当的、以克表示的氮的质量，6.25：氮换算成蛋白质的平均系数。

2、重复性：每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%。当粗蛋白含量在10%～25%之间时，允许相对偏差为2%。当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。